A legionelose é uma doença com forte impacto mediático, por estar frequentemente associada a surtos comunitários relacionados com água quente sanitária, torres de refrigeração, jacuzzis, fontes ornamentais, entre outros. Embora o método padrão para a deteção do patógeno seja o cultivo (UNE-EN ISO 11731), este apresenta várias limitações, como o longo tempo necessário para obter resultados, os cuidados rigorosos exigidos na manipulação da amostra para garantir a viabilidade dos microrganismos, a impossibilidade de detetar bactérias viáveis não cultiváveis e a dificultade de isolar a bactéria em amostras com elevada carga de microbiota acompanhante.

A distinção entre células vivcas e mortas é fundamental na deteção de Legionella spp., pois a simples presença de DNA deste microorganismo não implica necessariamente a existência de uma população viável e, portanto, capaz de causar infeção. Assim, o principal objetivo do projeto é desenvolver, otimizar e validar um protocolo, capaz de causar infeção. Assim, o principal objetivo do projeto é desenvolver, otimizar e validar um protocolo para a deteção e quantificação simultâneade células viáveis, e, por consiguinte, infetivas de três espécies patogénicas de Legionella spp., (L. pneumophila, L. micdadeii e L. longbeachae), utilizando qPCR múltipla combinada com um pré-tratamento com PMA. deste modo, pretende-se superar as limitações técnicas atuais, desenvolvendo um método inovador, inexistente no mercado, para a deteção rápida, sensível e específica de células viáveis não cultiváveis destas três espécies patogénicas de Legionella, através da combinação de PCR múltipla com um pré-tratamento com agentes intercalantes de DNA (como o Propídio de Monoazida, PMA). Este sistema permitirá obter um diagnóstico simultâneo de várias espécies patogénicas viáveis de Legionella em menos de 8 horas, tanto a partir de amostras de água como de amostras clínicas.

Este protocolo, além disso, permitir-nos-ia avaliar de forma eficiente os tratamentos de desinfeção, uma vez que possibilita distinguir as formas VBNC potencialmente inefetivas que surgem após esses tratamentos e que não seriam detetáveis por outros métodos.